液相色譜儀測定葛根素含量

葛根為豆科植物野葛 Pueraria lobata (Willd.) Ohwi的干燥根,是常用中藥材,具有解肌退熱，生津，透疹，升陽止瀉功效，用于外感發(fā)熱頭痛、項背強痛，口渴，消渴，麻疹不透，熱痢，泄瀉，高血壓頸項強痛等[1]。現(xiàn)代研究證實，葛根中的主要有效成分為葛根素等異黃酮類化合物，具有抗炎解熱、擴張冠狀動脈血管、增加冠狀動脈血流量的作用，同時也有降低血壓的作用。有關(guān)葛根中葛根素等異黃酮的含量測定研究已有不少報道[2-5]，但對葛粉中葛根素含量測定報道不多。本文對葛粉中葛根素的提取條件和測試條件等進行比較研究,并采用液相色譜法對葛粉樣品進行了定量分析, 結(jié)果令人滿意。

  　 1 實驗部分

  　 1.1 儀器與試劑

  　 LC－10tvp液相色譜儀；SPD－10T紫外檢測器；N2010色譜工作站，島津UV－265紫外分光光度儀，多功能榨汁機/攪拌機SG300－I。甲醇（色譜純），水（二次蒸餾），其余均為分析純。葛根素對照品（中國藥品生物制品檢定所）；鮮葛。

  　 1.2 色譜條件

  　用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；色譜柱Vertex C18 (150×4.6mm I.D)，MeOH－H2O－HAc（30：70：0.5）為流動相，紫外檢測波長250nm。

  　 2 結(jié)果與討論

  　 2.1 提取溶劑濃度的選擇

  　精密稱取同一樣品約0.1g,分別加30%乙醇、50%乙醇和80%乙醇10ml，超聲提取60分鐘，進樣5ul,比較峰面積，實驗結(jié)果表明30%乙醇提取。

  　 2.2 超聲提取時間的選擇

  　精密稱取同一樣品約0.1g,分別加30%乙醇10ml，超聲提取30分鐘、45分鐘、60分鐘，進樣5ul,比較峰面積，實驗結(jié)果表明超聲60分鐘為*提取條件。

  　 2.3 流動相及流速的選擇

  　 試驗時曾采用下述流動相進行測定：甲醇－水（25：75）、甲醇－水－醋酸（30：70：0.5）、甲醇－水（30：70）為流動相，結(jié)果采用甲醇－水－冰醋酸（30：70：0.5）為流動相，樣品分離好。而流速也以1.0ml/min為合適。

  　 2.4 標樣溶液的制備

  　稱取一定量葛根素對照品,用30%乙醇溶解配制成濃度為13ug/ml的葛根素標準液。

  　 2.5 葛粉制備

  　取鮮葛用水洗凈切片,稱取20g放入攪拌機內(nèi)，攪拌三次，每次1分鐘，每次加水200ml， 150ml，100ml，合并漿汁放置二天，去掉上面的水，下面的粉漿用定量濾紙過濾，低溫干燥，放入干燥器中備用。

  　 2.6 供試品溶液制備

  　稱取一定量葛粉于10mL容量瓶中,加30%乙醇10ml,超聲提取1h,濾紙過濾,濾液過0.45um濾膜作為供試品溶液。

  　 2.7 線性關(guān)系考察

  　 在上述色譜條件下，分別進標樣溶液0.5、3、5、7、10μl，測得各峰面積。以葛根素為橫座標（A），以峰面積（Y）為縱座標，計算得回歸方程：Y=3.90×106x+728.14,相關(guān)系數(shù)r＝0.9999；結(jié)果紫外檢測葛根素在0.0065-0.13μg范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

  　 2.8 精密度試驗

  　取上述標樣溶液，連續(xù)進樣5次，測定，RSD為1.11%。

  　 2.9 重復性試驗

  　取同一樣品重復測定5次，RSD為1.61%。

  　 2.10 穩(wěn)定性試驗

  　取上述供試品溶液，0、2、5、7、10h進樣，RSD為2.1%，10小時內(nèi)進樣穩(wěn)定。

  　 2.11 回收率試驗

  　 取已知含量的樣品，分別加入葛根素標樣，按上述方法測定5次，平均回收率為98.6%, RSD為1.76%。見表1。

  　 2.12 樣品分析

  　精密吸取標樣溶液5μl與供試品溶液5μl，注入液相色譜儀，測定，結(jié)果:葛粉中葛根素的含量為0.06%（n=3），見下圖。

  　 3 討論

  　本文采用液相色譜法測定葛粉中葛根素的含量,方法簡單、快速、準確，結(jié)果滿意，可用于葛粉中葛根素的含量測定。